A resposta de pacientes com leishmaniose ao tratamento antimonial pode variar em função de fatores como a cepa do parasito envolvido, estado imunológico do paciente e a forma clínica da doença. Os esquemas terapêuticos com antimônio pentavalente (Sb5+) têm sido frequentemente modificados quanto à dose e duração da terapia. Os efeitos colaterais observados com o uso de 20 mg/kg/dia de Sb5+ durante quatro semanas (dose recomendada para o tratamento da forma mucosa) são mais acentuados em pacientes idosos, os mais afetados pela forma mucosa (espundia) da doença. Nossa experiência demonstra que a forma cutânea ocorrendo no Rio de Janeiro responde muito bem ao tratamento com a dose de 5 mg/kg/dia de Sb5+ durante 30 ou 45 dias. Neste estudo foi obtida elevada eficácia (91,4%) com o mesmo regime terapêutico em 36 pacientes com espundia (que evoluem, contudo, com lesão crônica menos destrutiva do que o observado em outras áreas endêmicas) procedentes desta região. Os efeitos colaterais foram reduzidos, não havendo também qualquer resistência ao emprego de doses maiores nos casos que não responderam ao tratamento inicial.

Response to treatment with antimonial drugs varies considerably depending on the parasite strain involved, immune status of the patient and clinical form of the disease. Therapeutic regimens with this first line drug have been frequently modified both, in dose and duration of therapy. A regimen of 20 mg/kg/day of pentavalent antimony (Sb5+) during four weeks without an upper limit on the daily dose is currently recommended for mucosal disease ("espundia"). Side-effects with this dose are more marked in elderly patients, more commonly affected by this form of leishmaniasis. According to our experience, leishmaniasis in Rio de Janeiro responds well to antimony and, in cutaneous disease, high cure rates are obtained with 5 mg/kg/day of Sb5+ during 30 to 45-days. In this study a high rate of cure (91.4%) employing this dose was achieved in 36 patients with mild disease in this same geographic region. Side-effects were reduced and no antimony refractoriness was noted with subsequent use of larger dose in patients that failed to respond to initial schedule.

A new parasite species of Leishmania is described, L. (Leishmania) forattinii sp. n., which was isolated from a pooled triturate of liver and spleen of a opossum (Didelphis marsupialis aurita) and from skin samples from a rodent (Proechmys iheringi denigratus), captured in primary forest on the Atlantic Cost of Brazil. Our results on the basis of biological and molecular criteria indicate that this taxonomically distinct parasite ias a new species of the L. mexicana complex, but closely related to L. (L.) aristidesi Laison & shaw, 1979, as revelated by phenetic and phylogenetic numerical analyses of the enzyme data. L. forattinii was clearly distinguishable from other Leishmania species of the genus usisng enzyme electrophoresis, monoclonal antibodies, molecular karyotypes, analysis of restriction enzyme digestion patterns of kinetoplast DNA (kDNA), as well as the use of kDNA hybridization procedures.

The authors report a case of culture-proven disseminated American muco-cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania brasiliensis brasiliensis in an HIV positive patient. Lesions began in the oropharynx and nasal mucosa eventually spreading to much of the skin surface. The response to a short course of glucantime therapy was good.

The molecular karyotypes for 20 reference strais of species complexes of Leishmania were determined by contour-clamped homogeneous eletric field (CHEF) electrosphoresis. Determination of number/position of chromosome-sized bands and chromosomal DNA locations of house-keeping genes were the two criteria used for differentiating and classifying the Leishmania species. We have established two gel running conditions of optimal separation of chromosomes, wich resolved DNA molecules as large as 2,500 kilobase pairs (kb). Chromosomes were polymorphic in number (22-30) and size (200-2,500 kb) of bands among members of five complexes of Leishmania. Although each stock had a distinct karyotype, in general the differences found between strains and/or species within each complex were not clear enough for parasite identification. However, each group showed a specific number of size-concordant DNA molecules, wich allowed distinction among the Leishmania complex parasites. Clear differences between the Old and New world groups of parasites or among some New World Leishmania species were also apparent in relation to the chromosome locations of beta-tubulin genes. Based on these results as well as data from other published studies the potencial of using DNA karyotype for identifying and classifying leishmanial field isolates is discussed.

Um estudo sobre o grau de maturação das células do Sistema Fagocítico Mononuclear foi realizado durante a infecção in vivo e in vitro com a Leishmania mexicana amazonensis. A caracterização da diferenciação das células fagocíticas foi obtida com a localização ultraestrutural de dois marcadores enzimáticos bam conhecidos: a enzima 5'-Nucleotidase marcadora de membrana plasmática de células maduras e a enzima peroxidase, presente em grânulos, marcadora de células imaturas. A atividade da enzima 5'-Nucleotidase foi encontrada apenas em alguns macrófagos, presentes no foco inflamatório, em projeções da membrana plasmática e em algumas vesículas citoplasmáticas. Macrófagos peritoneais de camundongo apresentaram a mesma reatividade para este marcador. Contudo a análise da atividade peroxidásica demonstrou a predominância da presença de fagócitos mononucleares imaturos nas lesões crônicas induzidas neste sistema por Leishmania mexicana amazonensis.

The degree of maturation of cells of the Mononuclear Phagocyte System (MPS), during in vivo and in vitro infection by Leishmania mexicana amazonenesis, was evaluated in this study. The macrophages' differentiation was assayed by cytochemical characterization at the ultrastrctural level, using two well-established markers: 5'-nucleotidase enzyme activity, for revealing the mature cells, and the peroxidase activity present in the cell granules to demonstrate immature mononuclear phagocytes. only a few mcrophages, demonstrating 5'-nucleotidase positive reaction in both the plasma membrane and within their cytoplasmic vesicles, were found scattered in the chronic inflammation at the L. m. amazonensis lesions in albino mice. However, by the peroxidase activity analysis, we were also able to demonstrate the presence of immature MPS cells, which predominate, together with parasitized vacuolated macrophages, in chronic lesions induced in this systemby L. m. amazonensis. The implications of these results on the pathogenesis of murine cutaneous leishmaniasis are discussed.

Em lesões cutâneas, de um caso humano e de um cão, procedente de área endêmica de leishmaniose tegumentar no Rio de Janeiro, foi isolada L.d. chagasi. Ambas as culturas foram identificadas por caracterização molecular e immunológica do parasito utilizando três diferentes métodos: mobilidade eletroforética de isoenzimas, análise do kDNA e anticorpos monoclonais. Este parece ser o primeiro caso humano bem documentado, no Novo Mundo, de uma Leishmania "viscerotrópica" induzindo lesões cutâneas e demonstra que o diagnóstico do agente etiológico baseado somente na observação clínica e dados epidemiológicos pode levar a conclusões errôneas.

L.d. chagasi was isolated from active cutaneous leishmaniasis in both human and canine infections in an endemic area in Rio de Janeiro, Brazil. Both isolates were identified by molecular and immunological characterization of the parasite using three different methods: electrophoretic mobility of isoenzymes; restriction endonuclease fragment analysis of kDNA and serodeme analysis using monoclonal antibodies. This seems to be the first well documented case in the New World of a "viscerotropic" Leishmania inducing a case of cutaneous leishmaniasis. This observation emphasizes that the diagnosis of the etiologic agent of human or canine visceral leishmaniasis based solely upon clinical and epidemiological critwria may lead to erroneous conclusions.

Os autores lograram infectar flebótomos em um caso humano de leishmaniose tegumentar americana fazendo fêmeas de Lutzomyia longipalpis se alimentarem em paciente com lesões devida à Leishmania mexicana amazonensis.

The authors were able to infect phlebotomine sandflies on a human case of American Cutaneous Leishmaniasis by feeding females of Lutzomyia longipalpis on a patient with a lesion due to Leishmania mexicana amazonensis.

Durante inquéritos caninos realizados na periferia da cidade do Rio de Janeiro, foram estudados clínica e laboratorialmente 40 cães. Todos apresentavam diagnóstico parasitológico e/ou sorológico de leishmaniose. Dentre esses, 19 procediam de áreas de ocorrência de leishmaniose visceral (LV) - Realengo, Bangu e Senador Camará. Sinais clínicos sugestivos da infecção foram observados em 36,8% deles (incluindo emagrecimento - 100%, linfadenopatia e depilação - 85,7%). Outros 21 cães procediam da área de Campo Grande onde tanto a LV como a leishmaniose tegumentar americana (LTA) ocorrem. Sinais clínicos da infecção por Leishmania, principalmente ulcerações cutâneas e mucocutâneas, foram observadas em 76,2% deles. Em 39 cães foram encontrados leishmanias: 22% em vísceras, 42,5% em vísceras e pele normal e 35% um ulcerações cutâneas ou mucocutâneas. Todos os estoques de Leishmania isolados de cães provenientes das áreas de LV e da área de LV + LTA foram caracterizados como L. donovani (exceto em um caso) conforme seus esquisodemas, zimodemas e serodemas. O único estoque caracterizado como L. braziliensis brazilienzis foi isolado de linfonodo de um cão de Campo Grande, com leishmaniose visceral e sem alterações cutâneas. A tentativa de tratamento pelo antimonial em oito cães positivos para Leishmania donovani não reverteu o curso da doença e um deles apresentou intenso agravamento, morrendo em curto período.

Forty dogs from the periphery of the city of Rio de Janeiro were studied. All dogs where diagnosed as positive for leishmaniasis either parasitologically and/or serologically. Among them, 19 came from areas where only Visceral Leishmaniasis (VL) occurs (Realengo, Bangu, Senador Camará). Clinical signs of the disease were seen in 36.8% of the cases, including emaciation - 100%, lymphadenopathy and depilation - 85.7%. The other 21 dogs came from an area (Campo Grande) where both diseases (VL, and American Cutaneous Leishmaniasis - ACL) occur. Clinical signs of the disease, mainly cutaneous or mucocutaneous ulcers were seen in 76.2% of the cases. Leishmania parasites were found in 39 cases: 22% in viscera, 42.5% in viscera and normal skin and 35% in cutaneous or mucocutaneous ulcers. All the Leishmania stocks isolated from dogs which came from Realengo, Bangu, Senador Camará (VL area), and from Campo Grande (VL + ACL area) were characterized as L. donovani (except in one case) according to their schizodeme, zymodeme and serodeme. The only stock characterized as L. b. braziliensis, was isolated from the lymph node of a dog from Campo Grande with visceral disease and without skin lesions. Antimony therapy attempted in eight Leishmania donovani positive dogs was unsuccessful.

Células peritoneais de camundongos cultivadas in vitro foram infectadas com inóculos idênticos de amastigotas (AM) e de promastigotas, respectivamente, virulentas (VP), avirulentas (AVP) e fixadas (FP) de uma mesma cepa de Leishmania m. mexicana. As monocamadas coradas com May-Grunwald-Giemsa foram examinadas em diferentes intervalos de tempo. Ao nível de 3ª hora pós-infecção o número de macrófagos contendo parasitas variou entre 60,5% (VP) e 84% (AM) nas monocamadas expostas aos parasitas viáveis, comparados com 6,5% para aquelas expostas aos parasitas fixados. Entretanto, nesse tempo de interação, houve alterações degenerativas parasitárias e o número de macrófagos contendo parasitas intatos variou significantemente entre as células infectadas com AM (84%) e aquelas infectadas com VP (42%) ou AVP (40%). O número médio de parasitas intatos/macrófago também diferiu significantemente entre as células infectadas com AM e aquelas infectadas com promastigotas viáveis ou fixadas. A análise quantitativa de parasitas intatos e degenerados indicou uma multiplicação e destruição parasitaria nas monocamadas infectadas com VP e sobrevivência e multiplicação parasitarias naquelas infectadas com AM. Em contraste, nao houve evidencia de multiplicacao de parasitas nas células infectadas com AVP. Esses resultados sugerem que os eventos cruciais que determinam a evolução da infecção ocorrem durante as primeiras 24 horas da interação parasito-hospedeiro. Esses eventos são aparentemente influenciados não somente pela cepa do parasita ou do hospedeiro, mas também por variações ambientais induzidas em uma dada cepa parasitária.

Unstimulated adherent mouse peritoneal cells were cultured in vitro and infected with equal numbers of a single strain of Leishmania m. mexicana amastigotes (AM), virulent promastigotes (VP), avirulent promastigotes (AVP) and fixed promastigotes (FP). Duplicate May-Grünwald-Giemsa stained coverslips were examined at time intervals up to 13 days. By 3 hr post infection, the number of macrophages containing parasites varied between 60.5% (VP) and 84% (AM) for macrophages exposed to living parasites, compared to 6.5% for macrophages exposed for FP. However, variable numbers of parasites showed degenerative changes by 3 hr, and the number of macrophages containing morphologically intact parasites varied significantly between cells infected with AM (84%) and those infected with VP (42%) or AVP(40%). The mean number on intacte parasites/macrophage also differed significantly between AM-infected cells and living or fixed promastigotes-infected cells. Quantitation of intact and degenerated parasites indicated parasite multiplication, as well as destruction, in VP-infected cells and parasite survival and multiplication in AM-infecte monolayers; in contrast no evidence of parasite multiplication was seen in AVP-infected cells. Changes in the mono layer itself (cell loss and macrophage vacuolization) were also evaluated. These results suggest that crucial events determining the outcome of infection occur in the host-parasite relationship during the fist 24 hours of infection. These events are apparently influenced not only by parasite or host strain but by environmentally induced variation within a given strain.

Estudando a influência de alguns parâmetros relacionados ocm o hospedeiro no curso da infecção com Leishmania mexicana mexicana em camundongos singênicos C57B1/10 (C57) e não singênicos albinos (OA) demonstramos o papel importante das variáveis enumeradas a seguir: Cepa do hospedeiro: o desenvolvimento e tamanho das lesões variaram significativamente menos nos camundongos C57 do que nos OA. Idade do hospedeiro: inóculos subcutâneos de 2 x 10 [elevado a 4] a 2 x 10 [elevado a 6] amastigotas no dorso da pata trasiera produziram lesões significativamente maiores e que regrediram mais lentamente nos camundongos C57 de 2 meses de idade do que nos de 4 meses. Enquanto uma redução da capacidade de curar lesões foi também observada nas fêmeas C57 mais idosas (8 meses), uma mortalidade baixa ocorreu nos animais infectados de 15 meses de idade, de ambos os sexos. Local da lesão: as lesões de pata de C57 infectados com amastigotas regrediram entre 15 a 25 semanas, mas os da região perinasal, produzidas nesses animais com idêntico inóculo parasitário, foram persistente e progressivos, formando nódulos irregulares. Nos animais infectados simultaneamente em ambas as regiões, cada uma das lesões apresentou uma evolução semelhante àquela observada nos animais da mesma idade infectados em uma das regiões isoladamente, demonstrando que as involuções do processo nesses locais são fenômenos independentes. Assim, esses resultados indicam que enquanto a cepa do hospedeiro pode influir grandemente no curso da infecção, tais variávei como o sítio da lesão e a idade do animal também desempenham papéis importantes, podendo explicar, pelo menos em parte, a variabilidade nas respostas do hospediero face à infecção com uma determinada Leishmania.

Studies were undertaken to determine the influence of several host-related parameters on the course of Leishmania mexicana mexicana infection in inbred C57B1/10 (C57) and outbred albino (OA) mice. An important influence of the following variables was demonstrated: Host strain: lesions in C57s were significantly less variable in size and outcome than those of OAs under the conditions studied and even when persistent developed at a slower rate. Host age: Subcutanous injection of 2 x 10 [raised to the power of 4] to 2 x 10 [raised to the power of 6] amastigotes into the dorsum of the rear paw produced significantly larger lesions which healed more slowly in 2 mo. old C57s than in 4 mo. old mice. Reduced healing ability was observed in older (8 mo. old) female C57s, and low mortality occurred after 15 months of age in infected mice of both sexes. Lesion site: Following amastigote infection, lesions in paws of most C57s regress within 15 - 25 wks. In contrast, perinasal legions produced with the same number of parasites tend to persist for the life of the animal as slowly spreading irregular nodules. In animals infected in both locations, each lesion site behaves similarly to that in singly infected animals of the same age, i.e. regression in the two sites is independent. Our results indicate that while host strain may strongly influence infection outcoem, such variables as lesion site and host age play important roles and may explain, in part, reported inter- and intraexperimental variability in responses of murine hosts to a given leishmanial parasite.